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微生物檢測中的各種生化反應試驗

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微生物檢測中的各種生化反應試驗

發布日期:2019-12-19 作者: 點擊:


今天凱林小編給大家介紹一下微生物檢測的各種生化反應,什么是微生物生化反應?微生物生化反應:指用化學反應來測定微生物的代謝產物,生化反應常用來鑒別一些在形態和其他方面不易區別的微生物,因此微生物生化反應是微生物分類鑒定中的重要依據之一


微生物檢測試驗.jpg



微生物檢驗中常用的生化反應有:

一、糖酵解試驗

不同微生物分解利用糖類的能力有很大差異,或能利用或不能利用,能利用者,或產氣或不產氣??捎弥甘緞┘鞍l酵管檢驗。

試驗方法:以無菌操作,用接種針或環移取純培養物少許,接種于發酵液體培養基管,若為半固體培養基,則用接種針作穿刺接種。接種后,置36±1.0℃培養,每天觀察結果,檢視培養基顏色有無改變(產酸),小倒管中有無氣泡,微小氣泡亦為產氣陽性,若為半固體培養基,則檢視沿穿刺線和管壁及管底有無微小氣泡,有時還可看出接種菌有無動力,若有動力、培養物可呈彌散生長。

本試驗主要是檢查細菌對各種糖、醇和糖苷等的發酵能力,從而進行各種細菌的鑒別,因而每次試驗,常需同時接種多管。一般常用的指示劑為酚紅、溴甲酚紫,溴百里藍和an-drade指示劑。

二、淀粉水解試驗

某些細菌可以產生分解淀粉的酶,把淀粉水解為麥芽糖或葡萄糖。淀粉水解后,遇碘不再變藍色。

試驗方法:以18~24h的純培養物,涂布接種于淀粉瓊脂斜面或平板(一個平板可分區接種,試驗數種培養物)或直接移種于淀粉肉湯中,于36±1℃培養24~48h,或于20℃培養5天。然后將碘試劑直接滴浸于培養表面,若為液體培養物,則加數滴碘試劑于試管中。立即檢視結果,陽性反應(淀粉被分解)為瓊脂。培養基呈深藍色、菌落或培養物周圍出現無色透明環、或肉湯顏色無變化。陰性反應則無透明環或肉湯呈深藍色。

淀粉水解系逐步進行的過程,因而試驗結果與菌種產生淀粉酶的能力、培養時間,培養基含有淀粉量和ph等均有一定關系。培養基ph必須為中性或微酸性,以ph7.2最適。淀粉瓊脂平板不宜保存于冰箱,因而以臨用時制備為妥。

三、V-P試驗

某些細菌在葡萄糖蛋白胨水培養基中能分解葡萄糖產生丙酮酸,丙酮酸縮合,脫羧成乙酰甲基甲醇,后者在強堿環境下,被空氣中氧氧化為二乙酰,二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物,稱v-p(+)反應。

試驗方法:

o’meara氏法:將試驗菌接種于通用培養基,于36±1℃培養48h,培養液1ml加o’meara試劑(加有0.3%肌酸creatine或肌酸酐creatinine的40%氫氧化鈉水溶液)1ml,搖動試管1~2min,靜置于室溫或36±1℃恒溫箱,若4h內不呈現伊紅、即判定為陰性。亦有主張在48~50℃水浴放置2h后判定結果者。


barritt氏法:將試驗菌接種于通用培養基,于36±1℃培養4天、培養液2.5ml先加入5°cα萘酚(2-na-phthol)純酒精溶液0.6ml,再加40%氫氧化鉀水溶液0.2ml,搖動2~5min,陽性菌常立即呈現紅色,若無紅色出現,靜置于室溫或36±1℃恒溫箱,如2h內仍不顯現紅色、可判定為陰性。


快速法:將0.5%肌酸溶液2滴放于小試管中、挑取產酸反應的三糖鐵瓊脂斜面培養物一接種環,乳化接種于其中,加入5%α-萘酚3滴,40%氫氧化鈉水溶液2滴,振動后放置5min,判定結果。不產酸的培養物不能使用。

本試驗一般用于腸桿菌科各菌屬的鑒別。在用于芽胞桿菌和葡萄球菌等其它細菌時,通用培養基中的磷酸鹽可阻礙乙酰甲基醇的產生,故應省去或以氯化鈉代替。

四、甲基紅(methyl red)試驗

腸桿菌科各菌屬都能發酵葡萄糖,在分解葡萄糖過程中產生丙酮酸,進一步分解中,由于糖代謝的途徑不同,可產生乳酸,琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產物,可使培養基ph值下降至ph4.5以下,使甲基紅指示劑變紅。

試驗方法:挑取新的待試純培養物少許,接種于通用培養基,培養于36±1℃或30℃(以30℃較好)3~5天,從第二天起,每日取培養液1ml,加甲基紅指示劑1~2滴,陽性呈鮮紅色,弱陽性呈淡紅色,陰性為黃色。迄至發現陽性或至第5天仍為陰性、即可判定結果。

甲基紅為酸性指示劑,ph范圍為4.4~6.0,其pk值為5.0。故在ph5.0以下,隨酸度而增強黃色,在ph5.0以上,則隨堿度而增強黃色,在ph5.0或上下接近時,可能變色不夠明顯,此時應延長培養時間,重復試驗。

五、靛基質(imdole)試驗

某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應表現出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結合,形成玫瑰吲哚,為紅色化合物。

試驗方法:將待試純培養物小量接種于試驗培養基管,于36±1℃培養24h時后,取約2ml培養液,加入kovacs氏試劑2~3滴,輕搖試管,呈紅色為陽性,或先加少量乙醚或二甲苯,搖動試管以提取和濃縮靛基質,待其浮于培養液表面后,再沿試管壁徐緩加入kovacs氏試劑數滴,在接觸面呈紅色,即為陽性。

實驗證明靛基質試劑可與17種不的靛基質化合物作用而產生陽性反應,若先用二甲苯或乙醚等進行提取,再加試劑,則只有靛基質或5-甲基靛基質在溶劑中呈現紅色,因而結果更為可靠。

六、硝酸鹽(nitrate)還原試驗

有些細菌具有還原硝酸鹽的能力,可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽、氨或氮氣等。亞硝酸鹽的存在可用硝酸試劑檢驗。

試驗方法:臨試前將試劑的a(磺胺酸冰醋酸溶液)和b(α-萘胺乙醇溶液)試液各0.2ml等量混合、取混合試劑約0.1ml、加于液體培養物或瓊脂斜面培養物表面,立即或于10min內呈現紅色即為試驗陽性,若無紅色出現則為陰性。用α-萘胺進行試驗時,陽性紅色消退很快、故加入后應立即判定結果。進行試驗時必須有未接種的培養基管作為陰性對照。α-萘胺具有致癌性、故使用時應加注意。


江門市凱林貿易有限公司是專業從事微生物診斷試劑及醫學檢驗儀器生產、研發、銷售、服務的醫療器械企業我們不斷努力整合國內外微生物學、臨床醫學檢驗、計算機應用領域的專家智慧,將微生物技術與信息技術有機結合,精于從事微生物診斷試劑及醫學檢驗儀器的開發、產品改良與升級,憑籍不斷完善和創新發展的研發能力及規范、高效的運營管理,成功研制和生產系列微生物醫學檢驗產品40多個,推出了以微生物診斷試劑及檢測儀器為主的微生物系列產品,逐漸形成平皿培養基系列、試管培養基系列、院感培養系列、支原體鑒定及藥敏分析系列、樣品前處理系列等多個品種及產品組合

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關鍵詞:微生物檢測試驗,生化反應

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